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    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒

    发布时间:2014-01-06 15:19:20

    包装规格:480样/KIT;192样/KIT

    一、产品介绍:

        猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒用重组PRRSV的N蛋白包被,用来检测血清中N蛋白抗体。在猪群监测中,可为预防和控制该疾病提供有效的信息。

    二、实验原理:

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体ELISA检测试剂盒是通过间接ELISA检测血清中PRRSV抗体,用重组N蛋白包被,酶标抗体为猪抗IgG。操作步骤为样品稀释,加样,孵育,洗涤;再加入酶标抗体,如果血清中含有N蛋白抗体,则抗体会与酶标板上包被的重组N蛋白结合,酶标抗体也会与血清中N蛋白抗体结合,加入底物后,颜色将会变深。如果血清中没有N蛋白抗体,颜色变化会很小,或不发生变化。

    三、试剂盒内容:

    四、采样标准:

    1、尽可能采集新鲜血清样品;

    2、采集全血,分离出血清后,将血清存放在-20 ℃冰箱,以备使用;

    3、不要使用溶血或污染严重的样品;

    4、大中型猪场监测中,每群(后备母猪、经产母猪、断奶仔猪等)采样不少于35头份。

    五、注意事项:

    1、使用之前请仔细阅读操作说明;

    2、试剂盒存储条件:4-8 ℃。

    六、实验前准备:

    1、稀释10倍洗液:如20 mL洗液,加入180 mL去离子水混匀,备用;

    2、TMB底物显色液:使用前请恢复到室温,低温可能导致不显色。

    七、样品稀释:

    1、准备好1 mL样品稀释板或微量试管;

    2、100倍稀释样品:分步稀释,先加入90 μL样品稀释液,再加入10 μL的样品血清,混合均匀;再取90 μL样品稀释液,加入10 μL经过第一步稀释的血清,混合均匀即可。(阳性对照血清和阴性对照血清不要稀释)

    八、操作步骤:

    1、实验前准备及加样

    a使用前所有试剂盒组份都必须恢复到室温,试剂应轻轻旋转或振荡均匀;

    b取出包被板,标记好样品和阴、阳性对照的位置;(阴阳性对照各做两孔)

    c每孔分别加入100 μL阳性、阴性对照和稀释后的样品,贴上封板膜,22-27 ℃孵育30 min。

    2、洗板及加试剂

    a小心揭去封板膜,弃去各孔中液体,拍净。每孔加满洗液300 μL,洗3次。最后在吸水纸上拍净;

    b每孔加入酶标抗体100 μL,置22-27 ℃孵育30 min;

    c重复a,洗5-6次;

    d每孔加入TMB底物显色液100 μL,22-27 ℃避光孵育15 min。

    3、读数

    每孔加入终止液50 μL,置酶标仪450 nm波长处测定各OD450值。

    九、结果判定

    1、实验结果同时符合下列条件,方为有效:

    阳性值≥0.5               阴性值≤0.3

    2、判定标准:

    S/P值的计算方程式:

    S/P=【样品值-阴性值】/【阳性值-阴性值】

    S/P值≥0.4   判为阳性;

    S/P值<0.3   判为阴性;

    0.3≤S/P值<0.4   可疑。

    注:1 检测结果不能区分感染阳性还是免疫阳性;

    2 如果检测结果为可疑,请一个月后进行再次检测;

    3 如果有阳性结果异常的血清样品,计算该样品S/P平均值,有助于提供更多血清学分析信息。


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