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    猪瘟病毒(CSFV)抗体ELISA检测试剂盒操作说明书

    发布时间:2014-01-23 11:29:42

        一、产品类型:阻断ELISA试剂盒,检测猪瘟病毒抗体。
        二、产品介绍:
        猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是建立在多重诱捕阻断ELISA技术上,使用了CSFV的E2蛋白和单克隆抗体。用于检测和评估猪群免疫后CSFV中和抗体水平。
        三、实验原理:
        猪瘟病毒抗体阻断ELISA是将经过免疫亲和技术纯化的重组E2糖蛋白包被在酶标板上,如果样品中存在抗E2糖蛋白的抗体,那么在加入辣根过氧化物酶结合的抗E2糖蛋白单克隆抗体以及显色底物后,颜色将不会加深。颜色的OD值和血清样品中抗E2糖蛋白特异性抗体的量呈负相关。样品的OD值同阳性对照以及阴性对照比较后得到血清样品中抗体的百分比值。
        四、特点:
        猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清中抗E2糖蛋白的抗体,是一种快速、简单和特异的方法,可以排除其他瘟病毒抗体比如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的交叉反应。该方法同中和酶联分析法(NPLA)有非常好的相关性,同NPLA比较,敏感度97.7 % ,特异性99.2 %。
        五、试剂盒组成:
        名称                    数量
        1、包被板                  Coated Plate 2块
        2、10倍洗液               10×Washing Buffer 100毫升
        3、样品稀释液              Dilution Buffer 60毫升
        4、酶标抗体                HRP-Antibodies 40毫升
        5、阳性对照血清            Positive Control  1.0毫升
        6、阴性对照血清            Negative Control 1.0毫升
        7、TMB底物显色液         TMB Substrate 30毫升
        8、终止液                  Stop Solution 20毫升
        9、试剂盒操作说明书        Instruction Manual 1份   
        六、操作步骤:
        1、实验准备
        a 使用前所有试剂盒组份都必须恢复到室温,试剂应轻轻旋转或振荡均匀;
        b 稀释【10倍洗液】:如20mL洗液,加入180mL去离子水混匀,备用;
        c 取出【包被板】,在记录表上记录阴、阳性对照品和样品的加样位置。
        2、加样
        a 【包被板】每孔加入50 μL【样品稀释液】;
        b 加入【阳性对照血清】、【阴性对照血清】和待检血清各50 μL。其中【阳性对照血清】、【阴性对照血清】各加2孔,每份待检血清加1孔;
        c 贴上封板膜,22-27 ℃孵育1小时或2-4℃过夜。
        3、加【酶标抗体】
        a 小心揭掉封板膜,弃去各孔中液体,拍净。每孔加洗液300 μL,洗3次,最后在吸水纸上拍净;
        b 每孔加入【酶标抗体】100 μL,22-27 ℃孵育30分钟。
        4、加【TMB底物显色液】
        a 弃去各孔中液体,拍净。每孔加洗液300 μL,洗3次,最后在吸水纸上拍净;
        b 每孔加入【TMB底物显色液】100 μL,22-27 ℃避光孵育15分钟。
        5、终止反应和读数
        每孔加入【终止液】50 μL,轻振混匀,置酶标仪450 nm波长处测定各孔OD450nm值。
        七、结果判定:
        1、实验结果同时符合下列条件,方为有效:
        【阴性对照血清】OD450nm平均值>0.5
        【阳性对照血清】OD450nm平均值<0.2
        2、计算方法
        计算待检样品CSFV抗体阻断率:
        样品阻断率(%PC)=【阴性对照血清】OD450nm平均值-样品OD450nm值 ×100%
           【阴性对照血清】OD450nm平均值-【阳性对照血清】OD450nm平均值 
        3、判定标准
        a 样品%PC<40%,判为阴性;
        样品%PC≥40%,判为阳性;
        b 如果结果可疑,检查样品有无污染或重检;
        c 如果重检结果依然可疑,应结合猪场流行病学情况,重新采样并检测。

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