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    口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗体

    发布时间:2014-01-23 11:40:16

        一、介绍:
        口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起急性、热性高度接触性传染病,主要侵害偶蹄兽,一旦发生病,将会引起严重的经济损失。口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫毒属,目前已知共有7种血清型,即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲I型。口蹄疫病毒(FMDV)感染免疫后,产生抗体的主要中和表面在VP1蛋白的siteA(141-160),国际兽医局(OIE)规定的血清学检测方法是病毒中和试验和阻断ELISA,ELISA检测方法能够检测特定血清型抗体,不仅敏感性和符合性非常好,而且检测速度快,稳定好。FMDV-O型抗体ELISA检测试剂盒是通过阻断ELISA,检测O型中和抗体,用重组FMDV rP13C蛋白包被,抗VP1蛋白A位点单抗为酶标抗体。在免疫区能够用来做抗体监测和免疫效果评估。适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。
        二、试剂盒组成:
        名称                                      数量
        1、包被板 Coated Wells                    2块
        2、10倍洗液 10× Washing Buffer           100毫升
        3、样品稀释液 Dilution Buffer             60毫升
        4、酶标抗体 HRP  Antibodies (Type O)      40毫升
        5、阳性血清对照 Positive Control          1.0毫升
        6、阴性血清对照 Negative Control          1.0毫升
        7、TMB底物显色液 TMB substrate            30毫升
        8、终止液 Stop Solution                   20毫升
        9、试剂盒操作说明书 Instruction Manual    1份
        三、注意事项:
        1、使用之前请仔细阅读操作说明书;
        2、试剂盒存储条件:2-8 ℃;
        四、实验前准备:
        1、稀释10倍洗液:如20 ml洗液,加入180 ml去离子水混匀,备用。
        2、TMB底物显色液:使用前请恢复到室温,低温可能导致不显色。
        五、操作步骤:
        1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温,取出包被板;
        2、标记好样品、阳性对照和阴性对照(对照各做两个孔),每个孔加入样品稀释液80ul,然后加入样品血清、阳性对照、阴性
    对照各20ul;
        3、室温孵育60分钟;
        4、洗板:每孔加入洗涤液300 ul,洗涤3次,最后在吸水纸上拍干;
        5、每孔加入100 ul酶标抗体,室温孵育60分钟;
        6、重复步骤4,洗涤3次;
        7、每孔加入TMB底物显色液100 ul,室温避光孵育15分钟;
        六、读数:
        每孔加入50 ul终止液,在酶标仪450 nm波长处读数。
        七、结果判定:
        1、实验有效性判定:
        阴性对照OD值≥0.60      
        阳性对照OD值≤0.30
        2、判定标准:
        S/N值的计算方程式: S/N=【样品值/阴性值】
        S/N值≤0.60   判为阳性;   
        S/N值>0.60   判为阴性;
        注:如果检测结果可疑,对样品进行再次检测。

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